細(xì)胞代謝 細(xì)胞代謝是維持生命的一系列有序化學(xué)反應(yīng)的集合,它涉及到一系列復(fù)雜的生化反應(yīng)。這些反應(yīng)的正常進(jìn)行對(duì)于保持健康至關(guān)重要,而代謝異??赡軐?dǎo)致各種嚴(yán)重后果,可能會(huì)引起如代謝性疾病、腫瘤、神經(jīng)退行性疾病等。 當(dāng)前,糖代謝、脂質(zhì)代謝和氧化應(yīng)激是細(xì)胞代謝領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。細(xì)胞代謝研究主要基于以下兩種類(lèi)型的檢測(cè): 代謝物檢測(cè):使用特定試劑盒或基于代謝組學(xué)的方法來(lái)定量分析細(xì)胞中的特定代謝產(chǎn)物。通過(guò)測(cè)量不同代謝物的含量變化,可以了解細(xì)胞的代謝狀態(tài)以及某些代謝途徑是否被激活或抑制。 代謝酶檢測(cè):旨在確定特定代謝途徑中的限速酶
Foreword 自噬是一種細(xì)胞內(nèi)部的機(jī)制,通過(guò)將細(xì)胞內(nèi)成分包裹起來(lái)并運(yùn)輸?shù)饺苊阁w進(jìn)行降解,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的自我調(diào)節(jié)和清除有害物質(zhì)。1963年,Christian de Duve首次提出了自噬的概念。1990年,Yoshinori Ohsumi通過(guò)釀酒酵母實(shí)驗(yàn)直觀展現(xiàn)了自噬現(xiàn)象,并揭示了酵母和人的細(xì)胞中的自噬機(jī)制。2003年,自噬關(guān)鍵基因被命名為ATG基因,相關(guān)研究逐漸增加。2016年,Yoshinori Ohsumi獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)或生理學(xué)獎(jiǎng),自噬研究進(jìn)一步受到關(guān)注,成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、植物學(xué)和微生物學(xué)的熱門(mén)研究領(lǐng)域。自噬的發(fā)現(xiàn)對(duì)于細(xì)胞調(diào)節(jié)和藥物開(kāi)發(fā)具有重
2012年,哥倫比亞大學(xué)Brent R. Stockwell團(tuán)隊(duì)首次提出了一種名為鐵死亡的新型細(xì)胞程序性死亡方式。從此,鐵死亡相關(guān)研究熱潮逐年攀升。這期小編將帶領(lǐng)大家探究鐵死亡調(diào)控與肝纖維化的作用機(jī)制。 與細(xì)胞凋亡和細(xì)胞自噬不同,鐵死亡是一種依賴(lài)鐵的過(guò)程。鐵死亡的本質(zhì)是谷胱甘肽(GSH)的耗竭和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶4(GPX4)活性的降低。當(dāng)谷胱甘肽過(guò)氧化物無(wú)法被GPX4催化還原,脂質(zhì)過(guò)氧化物將無(wú)法代謝,從而破壞細(xì)胞膜的完整性,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。鐵死亡在形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)和遺傳學(xué)上有其獨(dú)特的表征。 ● 形態(tài)特征 表現(xiàn)為線粒體體積縮
細(xì)胞焦亡(pyroptosis)是一種新的程序性細(xì)胞死亡方式,其依賴(lài)于Gasdermin家族蛋白形成質(zhì)膜膜孔的、可調(diào)控的細(xì)胞死亡,經(jīng)常但并不總因炎癥性Caspase的活化而完成。其形態(tài)學(xué)特征在電鏡下觀察,可清楚看到在細(xì)胞質(zhì)膜破裂前,焦亡的細(xì)胞形成大量小泡,即焦亡小體。之后細(xì)胞膜上會(huì)形成孔隙,細(xì)胞膜破裂,內(nèi)容物流出。 細(xì)胞形態(tài)學(xué):根據(jù)細(xì)胞形態(tài)變,可初步鑒定細(xì)胞是否發(fā)生焦亡。通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察,可看到胞漿破裂或有大量細(xì)胞碎片的存在。 LDH釋放檢測(cè):乳酸脫氫酶(LDH)是存在于幾乎所有細(xì)胞內(nèi)的一種酶,當(dāng)細(xì)胞膜破裂時(shí),LDH能被釋放到培
乳腺癌的發(fā)病率逐年增高,并成為中國(guó)女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,是人們常說(shuō)的“紅顏殺手”。其中,三陰性乳腺癌惡性程度較高,患者生存預(yù)后較差,易出現(xiàn)早期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,且既往缺乏有效的針對(duì)性治療策略,素有最“毒”乳腺癌之稱(chēng)。近日,復(fù)旦大學(xué)腫瘤醫(yī)院邵志敏教授、江一舟教授課題組攜手復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院教育部/衛(wèi)健委/醫(yī)科院醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室趙超課題組,發(fā)現(xiàn)微生物代謝產(chǎn)物氧化三甲胺(TMAO)可以激活抗腫瘤免疫,提高三陰性乳腺癌免疫治療療效。這意味著微生物代謝產(chǎn)物TMAO有望成為三陰性乳腺癌臨床免疫治療的新策略,助推免疫治療。該項(xiàng)重要研究成果已在北京時(shí)間3月12日凌晨在國(guó)際權(quán)威期刊Cell Metabol
常見(jiàn)小鼠采血方法 小鼠是科研實(shí)驗(yàn)中常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,但由于其體積小,血管細(xì),采血難度大,進(jìn)而影響采血的質(zhì)量。 ELK簡(jiǎn)要總結(jié)了常見(jiàn)的小鼠采血方法,僅供參考: 一只成年小鼠的循環(huán)血量大約是1.5~2.5ml,大約體重的 6~8%。在對(duì)營(yíng)養(yǎng)狀況良好的小鼠進(jìn)行采血時(shí),單次采血量最多可以到達(dá)循環(huán)血量的10%,(例:若20克小鼠,它的總血量約占1.2-1.4毫升,即每次取120ul-140ul血液不會(huì)對(duì)小鼠有太大的影響)。采血之后應(yīng)該給予溫?zé)岬牡葷B溶液補(bǔ)充,可以在2~3個(gè)星期內(nèi)恢復(fù)原有的水平。兩周采血量小于血液循環(huán)的10%,單周小于7.5%,小鼠血液循環(huán)7
? 組織勻漿定義:將分化的細(xì)胞群用物理機(jī)械手段或其它方法,使細(xì)胞破碎,細(xì)胞內(nèi)容物釋放,與細(xì)胞碎片形成的固液混合形式的濃稠液體。 一、取適量組織塊,用預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.4)沖洗,去除表面殘留的血液與雜質(zhì)。(很多用戶疑惑,這個(gè)適量,到底是多少?ELISA試劑盒檢測(cè)中:血清或細(xì)胞上清樣本用量100μL/指標(biāo)(單孔);組織用量15mg/指標(biāo)(單孔),差不多干枯綠豆大小。?)具體老鼠各器官大小可見(jiàn)下圖。 二、將組織塊稱(chēng)重,再剪切成盡可能的小碎塊,以便充分勻漿; 三、可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:
酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作,可以簡(jiǎn)單地回答樣本中有多少蛋白質(zhì)/多肽/抗體這一基本問(wèn)題,是科研中比較常用的一種檢測(cè)方法。而這種簡(jiǎn)單的分析方法的核心,就是標(biāo)準(zhǔn)曲線。沒(méi)有它,我們的實(shí)驗(yàn)就變成了一個(gè)二元的“是/不是”測(cè)試。有了它,我們可以深入研究生物反應(yīng)的細(xì)節(jié)。那么,是什么使得標(biāo)準(zhǔn)曲線如此強(qiáng)大呢?讓我們?cè)贓LISA的背景來(lái)討論這個(gè)問(wèn)題。 簡(jiǎn)單地說(shuō),標(biāo)準(zhǔn)品就是一系列已知目標(biāo)蛋白數(shù)量的陽(yáng)性對(duì)照。例如,如果對(duì)人類(lèi)IgG進(jìn)行ELISA檢測(cè),標(biāo)準(zhǔn)曲線將包含逐漸減少的已知量的人類(lèi)IgG,它會(huì)讓你立刻得出一系列的結(jié)論。 1.我的EL
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